超声波DNA打断仪依靠超声波空化效应,将基因组DNA长链片段随机剪切为目标长度的短片段,广泛用于分子生物学相关实验,下面介绍主要应用领域。
基因组测序文库构建,这是最核心应用。二代高通量测序(NGS)建库时,需要把动植物、微生物、血液、组织样本的基因组DNA打断到200~1000bp区间。相比酶切打断,超声打断片段分布更随机,偏好性更低,适合全基因组测序、外显子捕获测序、宏基因组测序、肿瘤基因测序等项目,保障文库片段大小均一,提升测序数据质量。
染色质相关研究,用于ChIP、ChIP-seq实验。染色质需要被超声打断成合适片段,将DNA与结合的蛋白复合物保留,后续通过抗体富集目标蛋白结合的DNA片段,研究蛋白与DNA的相互作用。超声条件可调控片段长度,减少过度打断或者打断不足带来的实验失败,在表观遗传、转录调控研究中大量使用。
微生物分子检测领域,微生物基因组DNA提取后的片段化处理。土壤、水体、肠道微生物样品提取的DNA分子量大,利用超声打断制备宏基因组文库,用于微生物群落基因解析,研究菌株基因功能、耐药基因筛查。
分子诊断与临床样本研究,临床石蜡组织、外周血、体液样本的DNA片段化。液体活检项目中循环游离DNA可做进一步处理,也可对基因组DNA标准化打断,用于基因突变检测、拷贝数变异分析,为疾病分子机制研究、标志物筛选提供样本前处理。
质粒与PCR产物处理,质粒DNA、长片段PCR产物的可控剪切。用于质粒突变库构建、DNA片段随机化处理,研究基因片段功能。部分实验中通过超声破碎同时裂解细胞并打断DNA,简化样品前处理流程。
动植物分子育种研究,农作物、畜禽种质资源的基因组分析。从叶片、种子、动物组织提取基因组DNA,超声打断后构建测序文库,开展物种进化分析、遗传图谱构建、性状关联基因挖掘,助力育种基础研究。
其他科研应用,用于DNA理化性质研究,探究DNA链断裂损伤机制,构建DNA损伤模型;也可用于核酸蛋白复合物的样本前处理,在单细胞测序样品制备中辅助核酸片段化。
设备使用特点,可通过调节超声功率、脉冲时长、循环次数精准控制片段大小,重复性好,通量可适配单个样品到多样品板。缺点是处理过程会产生热量,需要冰水或制冷模块控温,防止核酸高温降解。
使用边界,主要用于核酸片段化前处理,不能直接完成测序或者基因检测;样本含有蛋白、多糖杂质时,杂质会影响空化效果,片段分布会变宽,需要提前纯化。仪器探头需要定期维护,避免交叉污染,不同样本之间做好清洁。